基因毒性雜質(zhì)（或遺傳毒性雜質(zhì)）是指化合物本身能夠直接或間接損傷細胞DNA，產(chǎn)生基因突變或體內(nèi)誘變，具有致癌可能或者傾向的一類物質(zhì)。近年來，已經(jīng)上市的藥品中由于存在痕量的基因毒性雜質(zhì)而引發(fā)大規(guī)模醫(yī)療事故，繼而藥品被召回的事件時有發(fā)生。FDA、EMA、ICH先后發(fā)布了對基因毒性雜質(zhì)的指導(dǎo)原則，推薦使用毒理學(xué)關(guān)注閾值TTC（1.5 μg/day）作為基因毒性雜質(zhì)的可接受限度。我國2020版《中國藥典》新增了《遺傳毒性雜質(zhì)控制指導(dǎo)原則》，藥企在研發(fā)過程中越來越關(guān)注基因毒性雜質(zhì)的控制和檢測。

　　磺酸酯類化合物作為一類典型的基因毒性雜質(zhì)，可以直接或間接地代謝活化后的烷基化DNA。現(xiàn)有的磺酸酯類化合物氣相和氣質(zhì)檢測方法通常需要進行衍生，操作繁瑣。運用GC進行檢測，方法定性能力差且靈敏度低，GC-MS方法雖然可以提高檢測靈敏度，但對于一些基質(zhì)復(fù)雜的藥物抗干擾能力較差。相較之下，GC-MS/MS方法具有較高的抗干擾能力以應(yīng)對復(fù)雜的藥物基質(zhì)，且檢測靈敏度高、準(zhǔn)確性好，是檢測藥品中磺酸酯類化合物的有效手段。因此，本應(yīng)用中心針對三種對甲苯磺酸酯基因毒性雜質(zhì)，基于自主研制的GC-MS/MS平臺建立了對甲苯磺酸酯的快速且高靈敏度的檢測方法。

關(guān)鍵詞：GC-MS/MS、醫(yī)藥、口服藥劑、對甲苯磺酸酯、基因毒性雜質(zhì)

實驗部分

儀器

表1氣相色譜—三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀

表2 氣相色譜—三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀參數(shù)

試劑及標(biāo)準(zhǔn)品

標(biāo)準(zhǔn)品：對甲苯磺酸甲酯、對甲苯磺酸乙酯、對甲苯磺酸異丙酯均購自Stanford Analytical Chemicals，于4℃冰箱保存。

試劑：丙酮和乙酸乙酯均為色譜級。

樣品前處理

（1）水溶性藥品

稱取藥品粉末，加水振搖均勻，超聲10 min，再加入乙酸乙酯，振搖混勻后充分超聲提取，取上層有機相經(jīng)無水硫酸鈉除水后，過濾膜，上機測試。

（2）脂溶性藥品

稱取藥品粉末，加入乙酸乙酯，振搖均勻，超聲10 min，過濾膜，上機測試。

線性和檢出限

在對應(yīng)的線性范圍內(nèi)，3種對甲苯磺酸酯類化合物的線性系數(shù)r均在0.995以上，線性良好。以5 μg/L 標(biāo)準(zhǔn)溶液進樣，按照S/N=10和S/N=3計算定量限和檢出限，檢出限為0.4~0.8 μg/L，定量限為1.3~2.7 μg/L，具體結(jié)果見表3。對甲苯磺酸酯類化合物總離子流圖如圖1所示。 

圖1  20.0 μg/L對甲苯磺酸酯類化合物總離子流圖

表3 對甲苯磺酸酯各組分信噪比（5 μg/L濃度水平下）以及檢出限和定量限

加標(biāo)回收率

對空白藥品進行加標(biāo)回收率測試，加標(biāo)濃度為1 μg/g，連續(xù)進樣三針，各目標(biāo)化合物計算濃度（單位為μg/L）與回收率結(jié)果如下所示，3種對甲苯磺酸酯平均回收率在80%~110%之間。

樣品測試

按照2.3中樣品前處理方法處理實際藥品，實際藥品中三種對甲苯磺酸酯均未檢出，色譜圖見圖2。

圖2  實際藥品色譜圖

結(jié)語

本文建立了一種使用三重四極桿氣質(zhì)聯(lián)用儀測定藥品中3種對甲苯磺酸酯類化合物的分析方法。本文考察了該方法的線性、精密度、靈敏度和準(zhǔn)確度等，結(jié)果顯示標(biāo)準(zhǔn)曲線線性良好，相關(guān)系數(shù)大于0.995，方法精密度低于10%，檢出限低于1 μg/L，定量限低于3 μg/L，回收率在80%~110%之間。因此，本方法可以對藥品中3種對甲苯磺酸酯類化合物進行快速、準(zhǔn)確、靈敏的定量分析。

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l 附錄

設(shè)備與耗材方案

一、EXPEC 5231 系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)配置詳情

二、標(biāo)準(zhǔn)品