N-亞硝胺二甲胺（NDMA）是一種具有N-N=O 結構的化合物，該化合物能與DNA反應使其烷基化，進而致癌。美國FDA曾爆出成品胃藥雷尼替丁中含有超過限量要求的亞硝胺類致癌物N-亞硝胺二甲胺，FDA 發(fā)布公告：召回美國市場上雷尼替丁產(chǎn)品，該公告中提到某些產(chǎn)品中的NDMA 含量會隨著時間推移而有所增加，進而可能導致雜質(zhì)含量高于可接受水平。國內(nèi)外多家藥品生產(chǎn)企業(yè)都曾因消化系統(tǒng)藥雷尼替丁中檢出超限NDMA而啟動召回。因此，監(jiān)管機構以及生產(chǎn)商需要一種分析檢測方法，來檢測該類藥物中的N-亞硝胺二甲胺，切實保障人民用藥安全。LC-MS/MS 方法具有高靈敏度、高分辨力、快速分析、結果準確等優(yōu)勢，可降低基質(zhì)干擾造成的假陰性或假陽性發(fā)生可能性，可以滿足藥品檢測較嚴格的靈敏度、專屬性和準確度要求。本文使用譜育科技EXPEC 5210三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)，開發(fā)適用于APCI源的LC-MS/MS方法，用于測試和定量雷尼替丁原料膠囊和片劑中的N-亞硝胺二甲胺。

實驗部分

標準品、試劑和設備

      標準品：N-亞硝胺二甲胺標準品購自中國食品藥品檢定院，于-20℃冰箱保存。

      樣品：鹽酸雷尼替丁膠囊，標號136#、105#、104#、61#、12#

      試劑：甲醇為色譜級，購自默克、甲酸為LC-MS級，購自安譜。  

      儀器：ULC 510超高效液相色譜儀（具體配有二元超高壓輸液泵、超高壓自動進樣器、柱溫箱）、EXPEC 5210三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀。

液相和質(zhì)譜條件

       監(jiān)測模式為多反應監(jiān)測(MRM)，N-亞硝基二甲胺化合物監(jiān)測離子對、錐孔電壓、碰撞能量等參數(shù)見下圖。

樣品前處理

      參考質(zhì)譜法（中國藥典2015年版四部通則0431）測定，具體前處理步驟如下：

      鹽酸雷尼替丁膠囊供試品溶液制備：取膠囊內(nèi)容物適量，相當于雷尼替丁300mg，至50mL離心管中，精密加入甲醇10mL，渦旋混勻1min，再振蕩40min，離心，取上清液濾過，取續(xù)濾液即得。

實驗結果

      線性：精密稱取N-亞硝基二甲胺對照品適量，加甲醇溶解并定量稀釋制成1mL中含1、2、5、10、50、100、250、500ng的溶液。按照上述方法依次進樣分析，采用外標法擬合后的標準曲線如下圖1所示，不同濃度N-亞硝基二甲胺譜圖疊加圖如圖2所示。

圖1 N-亞硝基二甲胺標準曲線

圖2  N-亞硝基二甲胺色譜疊加圖（線性不同濃度）

      靈敏度：精密稱取N-亞硝基二甲胺對照品適量，加甲醇溶解并定量稀釋制成1mL中含1ng的溶液，該溶液進樣測試色譜主峰的信噪比不低于10。

      穩(wěn)定性：精密稱取N-亞硝基二甲胺對照品適量，加甲醇溶解并定量稀釋制成1mL中含2ng的溶液，重復進樣6次，峰面積的RSD值為2.34%，符合所得峰面積的相對標準偏差不得超過10%的要求。

      加標回收率：鹽酸雷尼替丁膠囊樣品136#中N-亞硝基二甲胺含量未檢出作為空白樣品，精密稱取300 mg后分別加入不同濃度的標品，按照前處理步驟進行前處理平行處理6個，進樣測試后計算回收率。加標后溶液中N-亞硝基二甲胺濃度分別為：2 ng/mL、10 ng/mL、100 ng/mL。

樣品測試結果

      鹽酸雷尼替丁膠囊按照上述樣品前處理和儀器方法，樣品平行3次，每個平行樣品連續(xù)進樣2次，最終取平均值作為測試結果，測試結果匯總如下表4所示。

表4 鹽酸雷尼替丁膠囊樣品中N-亞硝基二甲胺測試結果匯總表

*ND=Not Detected

圖3鹽酸雷尼替丁膠囊樣品中N-亞硝基二甲胺測試譜圖

結語

      本文使用譜育科技EXPEC 5210 LC-MS/MS對鹽酸雷尼替丁膠囊中N-亞硝基二甲胺含量進行檢測，考察方法的線性、靈敏度、穩(wěn)定性、加標回收率。該方法簡單靈敏準確，可以較好地滿足鹽酸雷尼替丁膠囊中N-亞硝基二甲胺的檢測要求。

      完整報告下載：LC-MSMS法測定鹽酸雷尼替丁膠囊中N-亞硝基二甲胺

• 附錄

設備與耗材方案

一、EXPEC 5210 配置詳情

二、標準品